中華人民共和國國家標準

糧食、油料檢驗

粗蛋白質測定法

Inspection of grain and oilseeds

Methods for determination of crude protein

UDC (633.1+633.85).001.4

GB 5511－85

    本標準適用于商品糧食、油料中粗蛋白質含量的測定。

1  儀器和用具

1.1  凱氏燒瓶：50ml；

1.2  圓底燒瓶：1000ml；

1.3  萬用電爐；

1.4  錐形燒瓶：100ml；

1.5  微量滴定管：5ml、刻度0.01ml；

1.6  容量瓶：50ml；

1.7  移液管：5ml；

1.8  量筒：10ml；

1.9  洗耳球；

1.10  凱氏微量蒸餾裝置（見下圖）、膠管等。

凱氏微量蒸餾裝置圖

１－蒸餾瓶；２－冷凝管；３－承接瓶；４－回流管－５－漏斗；

６－活塞； ７－簧夾；８－燒瓶

2  試劑

2.1  濃硫酸－過氧化氫－水混合液(2：1：3)：在100ml水中緩慢加入濃硫酸200ml，冷卻后再加入30%過氧化氫300ml，混勻備用。此液存放陰涼處可保存一個月。

2.2  混合催化劑：硫酸銅(CuSO₄·5H₂O)10g，硫酸鉀(A.R)100g，硒粉0.2g，在研體中研細使通過40目篩，混勻后備用；

2.3  40%氫氧化鈉溶液；

2.4  2%硼酸溶液；

2.5  0.01N鹽酸溶液；

2.6  甲基紅乙醇溶液：0.1g甲基紅溶于75ml 95%乙醇中（先在研缽中加乙醇研磨）；

2.7  次甲基藍乙醇溶液：0.1g次甲基藍溶于80mL95%乙醇中。臨用時將以上兩液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫紅色，在pH5.5時溶液無色，在堿域呈綠色。

3  操作方法

3.1  消化

    按照含有10～30mg粗蛋白質計算試樣用量，一般可稱取試樣0.2～0.3g(W，精確到0.0001g)，用蠟光紙卷著倒入50ml凱氏燒瓶中，加混合指示劑1g，同時加入硫酸－過氧化氫－水混合液3～5ml，稍加振搖，斜置于電爐上，在通風櫥內加熱進行消化。開始時用低溫加熱，勿使瓶中泡沫超過瓶肚的三分之二，待泡沫減少和煙霧變白后再增加溫度保持微沸。消化到溶液呈淺藍綠色的透明狀時，再繼續加熱沸騰10min，取出待消化液冷卻至室溫后，加水10～20ml，再待溶液溫度降到室溫后，干凈地轉入50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻備用。

3.2  蒸餾

按照凱氏微量蒸餾裝置圖的安裝進行蒸餾和吸收。

在燒瓶8內加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示劑，加幾滴酸液使水呈紫紅色，連接4，1，2，并檢查有無漏氣處。

量取30ml 1%硼酸溶液注入錐形瓶３內，加混合指示劑２滴，使冷凝管下端插入液面下1cm處。量取稀釋的消化液5ml，由漏斗５注入瓶１內，再加入10ml，沖洗漏斗5。量取40%氫氧化鈉溶液1ml，提起活塞注入瓶１內，立即用水2～5ml沖洗漏斗５，旋緊活塞。這時瓶１內溶液總體積不要超過其容量的一半。

打開簧夾７，關閉活塞６，加熱燒瓶８，待瓶１內溶液開始沸騰時開始計時，經2min降低瓶３，使冷凝管下端露出液面，再蒸餾1min后，用水沖洗管下端。

蒸餾結束后，掐緊簧夾７，斷絕蒸汽，使瓶１內溶液全部吸入管４中，放松簧夾７，從漏斗５加入蒸餾水40～50ml，再通蒸汽加熱和回流，將瓶１洗滌一次備用。

3.3  滴定

用0.01N鹽酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出現淺紫紅色為止。

為消除試劑誤差，除不加試樣外，按照上述操作方法，做一次空白試驗。

4  結果計算

粗蛋白質的干基含量按下列公式計算：

粗蛋白質（干基%）

式中：V――蒸餾時取用稀釋的消化液體積，ml；

     V₁――實驗用去的鹽酸溶液體積，ml；

         V₀――空白試驗用去的鹽酸溶液體積，ml；

         Ｎ――鹽酸溶液的當量濃度，N；

         14――每毫克當量鹽酸相當于氮的克數；

         Ｐ――蛋白質換算系數（小麥5.7，其他谷物及豆類6.25）；

         Ｗ――試樣重量，mg；

         Ｍ――試樣水分百分率，%。

雙試驗結果允許差：粗蛋白質含量在15.0%以下時，不超過0.2%；粗蛋白質含量在15.1%以上時，不超過0.4%。求其平均數，即為測定結果，測定結果取小數點后第一位。

注：①消化過程中，若硫酸損失過多時，可酌量補加硫酸，勿使瓶內干涸。

    ②消化液加入稀釋后，應及時進行蒸餾，否則應保存消化液，臨用時加水稀釋。

③加入蒸餾瓶１內的堿液，必須過量。

④也可使用由0.2%甲基紅乙醇溶液１份和0.2%溴甲酚綠乙醇溶液５份配制的混合指示劑（臨用時混合），終點為灰紅色。

附錄Ａ

大豆水溶性蛋白質測定法

（補充件）

A.1  儀器和用具

1.1  粉碎機；

1.2  磨口帶塞錐形瓶：500ml；

1.3  振蕩器：國際型；

1.4  容量瓶：250ml；

1.5  離心機，附50ml離心管；

1.6  玻璃漏斗；

1.7  錐形瓶、移液管；

1.8  其他儀器和用具與本標準第１章同。

A.2  試劑

所用試劑與本標準第2章同。

A.3  操作方法

A.3.1  試樣制備：將大豆粉碎使90%以上通過60目篩。

A.3.2  提�。悍Q取粉碎試樣5g(W，精確至0.01g)于磨口帶塞錐形瓶中，加水200ml，搖混使均勻分散，然后在25～30℃溫度下振蕩2h，取出后將混合液轉移至250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻后靜置1～2min，將上層清液倒入離心管中，在每分鐘轉數1500轉的離心機中離心10min，再將離心液用快速濾紙或玻璃纖維過濾，收集清晰濾液于錐形燒瓶中，即為樣品水溶性蛋白質測定液。

A.3.3  定氮：吸取測定液10ml于50ml或100ml凱氏定氮瓶中，按本標準3.1、3.2、3.3步驟進行消化、蒸餾、滴定。記下滴定樣品液及空白液消耗鹽酸的數量。

A.4  結果計算

水溶性蛋白質含量按下列公式計算：

水溶性蛋白質（干基%）=

式中：V₁――滴定5ml樣品液消耗鹽酸體積，ml；

      V₀――滴定5ml空白液消耗鹽酸體積，ml；

      Ｎ――鹽酸溶液的當量濃度，Ｎ；

     0.014――每毫克當量氮的克數；

     6.25――大豆含氮量換算成蛋白質系數；

     10――吸收提取液進行消化的體積，ml；

    250――總提取液的體積，ml；

      5――吸收消化液進行蒸餾的體積，ml

     50――總消化液的體積，ml；

    Ｗ――試樣重量，g；

    Ｍ――試樣水分百分率，%。

雙試驗結果允許差不超過0.4%，求其平均數，即為測定結果。測定結果取小數點后第一位。

注：①大豆氮可溶解指數（％）的計算方法是：以所測得的大豆水溶性蛋白質（％）除以大豆總蛋白質（％），再乘以100即得。

②本方法采用樣品制備方法及提取方法使測定結果較為穩定，但如因粉碎樣品細度達不到要求，即可采用稱取試樣5.00g于研缽中，加5ml水，用手研磨10min，將混合物用200ml水轉移至250ml磨口瓶中，再在振蕩器上振蕩30min，然后同本標準的3.2進行定容、離心、過濾、定氮。

附加說明：

本標準由中華人民共和國商業部提出。

本標準由商業部糧食儲運局負責起草。

本標準主要起草人高修吾、楊浩然、吳艷霞、呂桂芬。